Cómo fabricar solución salina tamponada con fosfato (PBS)

PBS (solución salina tamponada con fosfato) es un tampón comúnmente utilizado para la tinción inmunohistoquímica y se utiliza comúnmente en la investigación biológica. La osmolaridad y las concentraciones de iones de las soluciones coinciden con las del cuerpo humano (isotónico).

PBS es una solución de sal a base de agua que contiene hidrogenofosfato de sodio, cloruro de sodio y, en algunos casos, cloruro de potasio y dihidrogenofosfato de potasio.

Tinción inmunofluorescente para IHC

La tinción inmunofluorescente fue el primer método de tinción inmunohistoquímica (IHC). Con la fundamentalidad de la reacción de unión antígeno-anticuerpo, los antígenos se vuelven visibles usando colorantes de fluorescencia cuando se conjugan con anticuerpos. El proceso ocurre cuando se activa al excitar luz de una longitud de onda específica bajo un microscopio fluorescente. La inmunohistoquímica se refiere al proceso de detección de antígenos (por ejemplo, proteínas) en las células de una sección de tejido mediante el uso del principio de anticuerpos que se unen específicamente a antígenos en tejidos biológicos.

Usos de solución salina tamponada con fosfato (PBS)

La solución salina tamponada con fosfato tiene muchos usos porque es isotónica y no tóxica para la mayoría de las células. Se puede usar para diluir sustancias y se usa para enjuagar contenedores que contienen células. El PBS se puede usar como diluyente en los métodos para secar biomoléculas porque las moléculas de agua que contiene se estructurarán alrededor de la sustancia (proteína, por ejemplo) para "secarse" e inmovilizarse en una superficie sólida.

La delgada película de agua que se une a la sustancia evita la desnaturalización u otros cambios conformacionales. Los tampones de carbonatos se pueden usar para el mismo propósito pero con menos efectividad. El PBS también se puede usar para tomar un espectro de referencia cuando se mide la adsorción de proteínas en la elipsometría.

Preparación de PBS

Hay muchas maneras diferentes de preparar PBS.

Algunas fórmulas no contienen potasio, mientras que otras contienen calcio o magnesio. La siguiente receta de memoria intermedia, que es relativamente fácil, es para una solución madre de 10X PBS (0. 1 M). También se proporciona una opción para agregar Tween. Todo el proceso toma alrededor de 10 minutos.

Cómo preparar solución salina tamponada con fosfato (PBS)

1. Pese lo siguiente: 10. 9 g de fosfato de sodio anhidro dibásico (Na2HPO4), 3. 2 g de fosfato de sodio anhidro monobásico (NaH2PO4) y 90 g de cloruro de sodio (NaCl).
2. Disuelva todo lo anterior en poco menos de 1 litro de agua destilada.
3. Ajuste el pH a 7. 4.
4. Haga que la solución alcance un volumen final de 1L.
5. (opcional) Para una solución que contenga 0. 5% de Tween 20, agregue 5mL Tween 20 a la solución de 1L.
6. Diluya 10X antes del uso y reajuste el pH si es necesario.

Consejos para hacer PBS Buffer

• Almacenar a temperatura ambiente.
• Los reactivos no anhidros pueden ser sustituidos, pero deberá recalcular la masa apropiada de cada uno para acomodar las moléculas de agua agregadas.

Lo que necesita hacer Tampón PBS

• Fosfato sódico monobásico (anhidro)
• Fosfato sódico dibásico (anhidro)
• Cloruro sódico
• Básculas y pesas
• Agitador magnético y barra agitadora > sonda de pH, calibrada, y soluciones apropiadas para ajustar el pH
• matraz volumétrico de 1 l
• Tween 20 (opcional)