Video: pka y pH | Cómo preparar un buffer de fosfatos pH 7.3 2025
¿Qué hace que los tampones de fosfato se destaquen? En primer lugar, debido a que contiene tres protones ácidos, el ácido fosfórico tiene múltiples constantes de disociación y puede usarse para crear tampones para cualquiera de los tres pH correspondientes.
Los tres valores de pKa para el ácido fosfórico (del Manual de Química y Física del CRC) son 2. 16, 7. 21 y 12. 32. El fosfato monosódico y su base conjugada, el fosfato disódico se usan generalmente para generar tampones de pH. valores alrededor de 7, para aplicaciones biológicas, como se muestra aquí.
Hacer este buffer es un poco más difícil que hacer buffers TAE y TBE. Sin embargo, no es extremadamente difícil. Simplemente promedio Debe tomar alrededor de 10 minutos para acelerar este buffer. Así es cómo.
1. Decida sobre las propiedades del buffer
Antes de hacer un buffer, primero debe saber qué molaridad quiere que sea, qué volumen hacer y cuál es el pH deseado. La mayoría de los tampones funcionan mejor en concentraciones entre 0. 1 M y 10 M. El pH debe estar dentro de 1 unidad de pH de la base ácida / conjugada pKa. Para simplificar, este cálculo de muestra será para 1 litro de buffer.
2. Determine la relación de ácido a base
Use la ecuación de Henderson-Hasselbalch (abajo) para determinar qué proporción de ácido a base se requiere para hacer un buffer del pH deseado. Use el valor pKa más cercano al pH deseado y la relación se referirá al par conjugado ácido-base que corresponde a ese pKa.
HH Ecuación: pH = pKa + log ([Base] / [Ácido])
Para un tampón de pH 6.9, [Base] / [Ácido] = 0. 4898
Sustituye a [Ácido] y Resuelve para [Base]
La molaridad deseada del búfer es la suma de [Ácido] + [Base].
Para un buffer de 1 M, [Base] + [Ácido] = 1 y [Base] = 1 - [Ácido]
Sustituyendo esto en la ecuación de relación, desde el paso 2, obtienes: < [Ácido] = 0. 6712 moles / L
Resolver para [Ácido]
Usando la ecuación: [Base] = 1 - [Ácido], puedes calcular que:
[Base] = 0 .3288 moles / L
3. Mezcle el ácido y la base de conjugado
Después de usar la ecuación de Henderson-Hasselbalch para calcular qué proporción de ácido se necesita para su tampón, prepare justo por debajo de 1 litro de solución usando las cantidades correctas de fosfato monosódico y fosfato disódico. .
4. Verifique el pH
Use una sonda de pH para confirmar que se alcanza el pH correcto para el tampón. Ajuste ligeramente según sea necesario, usando ácido fosfórico o hidróxido de sodio (NaOH).
5. Corrija el volumen
Una vez que se alcanza el pH deseado, lleve el volumen del buffer a 1 litro. Luego diluya el buffer como lo desee. Este mismo buffer puede diluirse para crear memorias intermedias de 0. 5 M, 0. 1 M, 0. 05 M o cualquier cosa intermedia.
6. Consejos para el Buffer
Recuerde que pKa no se mide fácilmente con un valor exacto.Valores ligeramente diferentes pueden estar disponibles en la literatura de diferentes fuentes.
7. Lo que necesita
Para hacer el buffer, necesitará tres sustancias, mientras que el resto del material son equipos. Las sustancias son fosfato monosódico, fosfato disódico y ácido fosfórico o hidróxido sódico para ajustar el pH.
También necesitarás un medidor de pH y una sonda y material de laboratorio apropiado. Esto incluye un matraz volumétrico, cilindros graduados, vasos de precipitados y barras de agitación.
Por último, necesitarás una placa de cocina con agitación.
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