Video: Preparing Tris Buffer 2025
El tampón TAE es una solución compuesta por Tris base, ácido acético y EDTA (Tris-acetato-EDTA). Históricamente, es el tampón más común utilizado para la electroforesis en gel de agarosa en los análisis de productos de ADN resultantes de la amplificación por PCR, los protocolos de purificación de ADN o los experimentos de clonación de ADN.
Este buffer tiene una baja fuerza iónica y baja capacidad de buffering. Se adapta mejor a la electroforesis de piezas de ADN grandes (> 20 kb) y deberá reemplazarse con frecuencia o recircularse durante períodos de tiempo de gelificación más largos (> 4 h).
Con esto en mente, es posible que desee considerar varios lotes del búfer.
Dado que el almacenamiento en memoria intermedia es fácil de realizar y los pasos se pueden llevar a cabo rápidamente, hacer más de un lote a la vez no debería consumir mucho tiempo o ser difícil de lograr. Usando las instrucciones a continuación, debería tomar solo 30 minutos para hacer el buffer TAE. He aquí cómo:
Prepare una solución madre de EDTA
Una solución de EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) se prepara con anticipación. El EDTA no entrará completamente en una solución hasta que el pH se ajuste a aproximadamente 8. 0. Para una solución madre de 500 mililitros de EDTA 0, 5 M, pese 93, 05 gramos de sal disódica EDTA (FW = 372. 2 ) Disuelva en agua desionizada de 400 mililitros y ajuste el pH con hidróxido de sodio (NaOH). Rellene la solución hasta un volumen final de 500 mililitros.
Batir una solución madre de TAE
Hacer una solución madre concentrada (50x) de TAE pesando 242 gramos de Tris base (FW = 121. 14) y disolviéndola en aproximadamente 750 mililitros de agua desionizada.
Añadir con cuidado 57, 1 mililitro de ácido glacial y 100 mililitros de EDTA 0, 5 M (pH 8, 0). Después de eso, ajuste la solución a un volumen final de 1 litro. Esta solución madre puede almacenarse a temperatura ambiente. El pH de este tampón no se ajusta y debe ser de aproximadamente 8. 5.
Prepare una solución de trabajo de TAE
La solución de trabajo del tampón TAE 1x se fabrica simplemente diluyendo la solución madre en 50x en agua desionizada.
Las concentraciones finales de soluto son 40 mM. Tris acetato y EDTA 1 mM. El buffer está ahora listo para usar en la ejecución de un gel de agarosa.
Lo que necesita para el buffer
Dado que hacer el buffer TAE solo requiere un conjunto de instrucciones rápido y simple, la cantidad de materiales necesarios no es excesiva. Solo necesitará EDTA sal disódica, base Tris y ácido acético glacial.
Hacer el buffer también requiere un medidor de pH y estándares de calibración, según corresponda. También necesitará recipientes o matraces de 600 mililitros y 1500 mililitros, así como cilindros graduados. Finalmente, necesitará agua desionizada, barras de agitación y placas de agitación.
Envoltura
¿Dónde planeas hacer el buffer - en un sitio escolar, un sitio de trabajo u otro lugar, como tu casa?Verifique el inventario antes de comenzar a asegurarse de tener todos los materiales anteriores para el buffer TAE.
Si prefiere no tener que pagar por los materiales, se recomienda optar por hacer que el buffer esté fuera de su hogar. Puede solicitar fácilmente los materiales que necesita en línea o visitar una tienda especializada para ellos.
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