Cómo liofilizar una cultura bacteriana (liofilización)

La liofilización, también llamada liofilización o criodesecación, consiste en eliminar el agua de un producto después de que se congela (y luego se lo coloca al vacío), permitiendo que el hielo cambie de sólido a vapor. sin pasar por una fase líquida. El hielo (u otros disolventes congelados) se eliminan de un producto a través del proceso de sublimación y las moléculas de agua unidas se eliminan a través del proceso de desorción.

Los fundamentos de la liofilización

Una de las mejores maneras de almacenar un cultivo bacteriano, fúngico, de levadura u otro microorganismo durante largos períodos de tiempo es utilizar el proceso de liofilización. Este breve procedimiento de laboratorio se puede realizar con cualquier liofilizador disponible comercialmente que preserve su colección de cultivo. Debido a que la liofilización es la forma de secado más compleja y costosa, el proceso generalmente se restringe a materiales delicados y sensibles al calor de alto valor. Las sustancias que no se dañan con la congelación generalmente se pueden liofilizar, por lo que el almacenamiento refrigerado es innecesario.

Este proceso puede tomar tan poco como tres horas, y hasta 24 horas, sin incluir el tiempo de crecimiento de la cultura.

El proceso paso a paso de la liofilización

1. Primero, cultive una cultura de cultivo nocturno, o césped, del microorganismo en LB u otra placa de agar nutriente apropiada.

2. A continuación, prepare los viales estériles con tapa engarzado mediante autoclave con anticipación, con las tapas (tapones de goma) colocadas sueltas en la parte superior. Coloque etiquetas de papel impresas con la identificación del cultivo dentro de los tubos antes de esterilizarlas en autoclave. Alternativamente, use tubos con tapas diseñadas para la esterilidad.

3. Agregue 4 ml de tampón de liofilización a la placa. Si es necesario, las células se pueden suspender con una varilla de vidrio estéril.

4. Transfiera rápidamente la suspensión de cultivo a los viales esterilizados. Agregue aproximadamente 1. 5 mL por vial. Sello con la tapa de goma.

5. Congele la suspensión de cultivo dentro de los viales colocando los viales en un congelador de -20 grados Celsius.

6. Una vez que los cultivos estén congelados, prepare el liofilizador encendiéndolo y dejando tiempo para que se estabilicen la temperatura y las condiciones de vacío apropiadas. Haga esto de acuerdo con las instrucciones del fabricante para la marca particular de liofilizador que está usando.

7. Con cuidado y de forma aséptica, coloque las tapas de los viales sueltas en la parte superior de los viales, de modo que la humedad pueda escapar durante el proceso de liofilización, y coloque los viales en una cámara de liofilización. Aplique el vacío a la cámara de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

8. Permita que el tiempo de cultivo se liofilice por completo (seque). Esto puede tomar desde unas pocas horas hasta la noche, dependiendo del volumen de cada muestra y la cantidad de muestras que tenga.

9. Retire las muestras de la cámara del liofilizador de acuerdo con las instrucciones del fabricante e inmediatamente selle los viales con las tapas de goma y luego con las tapas engarzadas.

10. Almacene la colección de cultivo liofilizado a temperatura ambiente.

Productos que necesitará

• Liofilizador
• Nutriente u otras placas de agar adecuadas (y una incubadora para cultivar)
• Varilla de vidrio
• Tampón de liofilización
• Viales con tapa de goma con tapones de goma (y un rizador para aplicar las tapas)
• Congelador

_{Referencia:
SP Scientific. Principios básicos de liofilización. // www. spscientific. com / congelación-secado-liofilización-básicos /}