RFLP: definición y sus usos para resolver misterios de ADN

El polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) es un método molecular de análisis genético que permite identificar a los individuos en función de patrones únicos de corte de enzimas de restricción en regiones específicas del ADN.

También conocido como Análisis RFLP, la técnica aprovecha los polimorfismos en los códigos genéticos de las personas individuales. Aunque todos los miembros de una especie tienen esencialmente la misma composición genética, estas pequeñas diferencias explican las variaciones en el fenotipo, como la apariencia o el metabolismo, entre individuos.

RFLP: Técnica de análisis y aplicaciones

La técnica de análisis RFLP consiste en cortar una región particular de ADN con variabilidad conocida, con enzimas de restricción, luego separar los fragmentos de ADN mediante electroforesis en gel de agarosa y determinar el número de fragmentos y tamaños relativos.

Una enzima de restricción es una enzima, una molécula de proteína, que corta el ADN en sitios de restricción. En esencia, la muestra de ADN se rompe y se digiere mediante las enzimas de restricción. Los fragmentos resultantes se separan de acuerdo con sus longitudes y el patrón de tamaños de fragmentos será diferente para cada individuo probado.

El proceso completo de RFLP requiere etiquetado de la sonda, fragmentación del ADN, electroforesis, transferencia, hibridación, lavado y autorradiografía. El RFLP detectado se visualiza utilizando una película de rayos X en una autorradiografía, donde los fragmentos de ADN se pueden ver y analizar después de que se separan unos de otros por electroforesis.

Algunas de las aplicaciones para el análisis de RFLP incluyen:

• huellas digitales de ADN . Los científicos forenses pueden usar el análisis de RFLP para identificar a los sospechosos en base a muestras de evidencia recolectadas en escenas de crímenes.
• Paternidad. RFLP también se usa en la determinación de la paternidad o para buscar ascendencia.
• Diversidad genética. La técnica se puede utilizar para estudiar la evolución y la migración de la vida silvestre, estudiar los patrones de reproducción en poblaciones animales y detectar y diagnosticar ciertas enfermedades.

La técnica de usar la detección de variación de RFLP en los genomas es una herramienta vital en el mapeo del genoma y el análisis de enfermedades genéticas.

Si se busca la ubicación de un gen de enfermedad particular en un determinado cromosoma, los investigadores analizarán el ADN de los miembros de una familia con la enfermedad y luego buscarán patrones de herencia similares en los alelos de RFLP. Una vez que se localiza un gen de la enfermedad, la realización de análisis de RFLP en otros miembros de la familia podría revelar un transportador de los genes mutantes o señalar el riesgo general de enfermedad.

Es importante notar que la técnica de RFLP no se usa ampliamente ahora que se usan técnicas más nuevas y más robustas para el análisis de ADN en la ciencia forense y en otros campos.

Aspecto negativo del análisis

Desafortunadamente, la técnica de análisis de RFLP es tediosa y lenta. Además de requerir una gran cantidad de muestra de ADN, la muestra generalmente necesitaría tener aproximadamente el tamaño de un cuarto, que es relativamente grande para las muestras de ADN; el proceso, desde el etiquetado de la sonda hasta el lavado y la autorradiografía, puede llevar hasta un mes completo para completar.

Los resultados del Proyecto Genoma Humano prácticamente han reemplazado la necesidad de RFLP. El proyecto permitió determinar la secuencia completa del ADN encontrado en las células humanas, el genoma humano, y para identificar todos los genes en el genoma humano.